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詳解生化試劑抗干擾作用的合理性

更新時間:2012-08-13點擊次數(shù):289

  
  有些液體雙試劑,其實質并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問題。下面具體講解幾個例子:

1、如ALT試劑盒中,NADH在pH7.5~7.8水溶液中極不穩(wěn)定,在pH>8.7時才能穩(wěn)定保存。因此,為了保證試劑穩(wěn)定性,液體雙試劑的R1需要維持pH>8.7,但此時LDH活性大大下降,就失去消除內源性丙酮酸的功能,只有加入試劑R2后,反應混合液的pH下降至LDHzui適pH,在經(jīng)過延遲時間60S后,才能消除內源性丙酮酸的干擾。

2、再如Tfinder反應中抗Vc干擾問題:由于維生素c易氧化,樣品中Vc會競爭反應生成的過氧化氫,而產(chǎn)生負干擾。因此,在試劑R1中加入抗壞血酸氧化酶,這種方法是有效的,但不一定有很大的意義。因為Vc干擾必須同時具備二個條件:a)Vc攝入量較多;b)采血后立即測定。實驗表明離體血清中Vc在90min后會全部被氧化。

3、又如使用胺類新色原。a)分子共軛結構特性使得靈敏度提高,相應可以減少樣本用量,zui終能有效地降低干擾物的量.b)使生成胺類色素原zui大吸收峰由500~520nm移至550nm以上,以避開黃疸、溶血干擾。如亞鐵氰化鉀一H0,能有效避免黃疸干擾的理論依據(jù)是亞鐵氰化鉀與H。0。親和力遠遠大于膽紅素。甘油三酯測定,有人主張選用雙試劑方法消除內源性甘油,這個方法是可行的,但忽視了一個化學平衡理論。因為所有的酯在水溶液中都不是簡單地以酯的形式存在,而是以水解與酯化相平衡的形式存在。在一個平衡體系中,如果去除游離甘油,這個平衡就向生成甘油方向移動,甘油三酯就會重新水解,生成新的甘油,達到新的平衡,因此樣品與R1試劑孵育時間越長,測得甘油三酯值就越低。甘油三酯測定,不僅要去除游離甘油,而且還要克服樣本含量真實性發(fā)生的變化,試劑中必須加入甘油激酶,并且延遲時間要標準化。

   所以一些試驗項目在消除內源性物質干擾的同時,會帶來樣品含量真實性的變化。
  
  


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