1、免疫脾細(xì)胞的制備

   制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。一般血清的制備，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。

2、骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選

   在融合前，骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選，防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期。

3、細(xì)胞融合的關(guān)鍵:

①技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。②融合試驗(yàn)zui大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術(shù)。

4、陽性克隆的篩選

   通常在融合后10天作*次檢測(cè)，過早容易出現(xiàn)假陽性。檢測(cè)方法應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確、而且簡便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)，以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫熒光法等。

5、克隆化
 
   克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選。這是因?yàn)槌跗诘碾s交瘤細(xì)胞是不穩(wěn)定的，有丟失染色體的傾向。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株。

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