為分析二抗的使用情況，我們隨機(jī)抽取了100篇2007年或2008年發(fā)表于Science 或 Journal of Biological Chemistry雜志上的 文章（英文），這些文章涵蓋了來自于16個(gè)國家的約80個(gè)研究機(jī)構(gòu)。收集的數(shù)據(jù)顯示二抗的使用非常廣泛，可以應(yīng)用到幾乎所有類型的免疫檢測(cè)中，尤其是Western blot、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)。事實(shí)上，二抗在ELISA及流式細(xì)胞術(shù)中應(yīng)用也很廣泛，不僅用于科學(xué)研究，而且廣泛的應(yīng)用于臨床分析和疾病診斷。比較而言，二抗在免疫沉淀中的應(yīng)用相對(duì)較少。以下內(nèi)容是基于對(duì)所收集的二抗信息進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后得出的一些結(jié)論，對(duì)于您在具體的實(shí)驗(yàn)中如何選擇的抗體具有借鑒作用。

選擇二抗時(shí)，您必須考慮到以下因素，如一抗的物種、產(chǎn)生二抗的宿主、一抗的類別或亞類、二抗所耦聯(lián)的探針類型及二抗的形式（如整個(gè)IgG分子，F(xiàn) （ab’） 2片段，或Fab片段）等等。因此選擇哪種類型的二抗很大程度上決定于您所使用的一抗是什么，尤其針對(duì)種屬和類別而言。

通常情況下，一抗可以在山羊、小鼠、兔子、大鼠及綿羊體內(nèi)制備，其中屬小鼠及兔子zui為常見，相應(yīng)的，二抗的種屬也應(yīng)當(dāng)與一抗的相一致。而對(duì)于制備二抗的宿主，則應(yīng)選擇另外一種不同的動(dòng)物，一般選用驢、山羊、兔子、綿羊或其他較大的動(dòng)物，可以實(shí)現(xiàn)二抗的大規(guī)模制備，其中又屬山羊使用zui多。

對(duì)于二抗類別或亞類的選擇，應(yīng)遵循與一抗類別或亞類相一致的原則，其中抗IgG使用zui多。這可能是因?yàn)槌宋宸N類別的單克隆抗體外，很多一抗是多克隆抗體，屬于IgG類免疫球蛋白。此外anti-IgG可以識(shí)別幾乎所有類型的IgG亞類，因此，在不清楚一抗是屬于那個(gè)類別或亞類的時(shí)候，anti-IgG抗體是個(gè)不錯(cuò)的選擇。從我們的數(shù)據(jù)來看，值得注意的是， IgG亞類特異性的二抗（如抗IgG1, 抗IgG2, 抗IgG2a, 抗IgG2b）通常用于雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中，包括免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)。

此外，整個(gè)IgG分子是zui常用的一種二抗分子形式，而F （ab’） 2片段或Fab片段一般僅用于特殊實(shí)驗(yàn)中，如需要避免抗體與具有Fc受體的細(xì)胞結(jié)合的情況，或需要封閉內(nèi)源性免疫球蛋白的時(shí)候。

對(duì)于二抗所耦聯(lián)的探針的選擇，主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于Western blot，zui常用的探針是辣根過氧化酶（HRP），堿性磷酸酶（AP）的使用也很多，但不如HRP使用廣泛。此外，IRDye （如 IRDye 680、IRDye 800） and Alexa Fluor dye （如Alexa 680 ） 等系列染料也偶爾應(yīng)用于 western blot當(dāng)中。通過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，來自于Amersham Biosciences、Bio-Rad、Cell Signaling、GE Healthcare Bio-Science、Jackson ImmunoResearch Laboratories、LI-COR Biotechnology、Pierce Biotechnology、Santa Cruz Biotechnology、Sigma 及 Zymed Laboratories公司的HRP標(biāo)記的二抗在Western blot中均有廣泛使用；而對(duì)于AP標(biāo)記的二抗，您可以選擇Jackson ImmunoResearch Laboratories、Sigma、Bio-Rad 及DAKO公司。

對(duì)于免疫熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)（包括免疫細(xì)胞化學(xué)及免疫組織化學(xué)），應(yīng)用zui廣泛的是耦聯(lián)有Alexa Fluor系列染料的抗體（如Alexa Fluor 488, 546, 568, 594, 596, 647, 633）、花青染料（Cyanine）系列標(biāo)記的抗體（如Cy2, Cy3, and Cy5）、FITC及羅丹明（Rhodamine）。其中對(duì)于Alexa Fluor標(biāo)記的二抗，推薦選擇Invitrogen 公司或Molecular Probes公司（現(xiàn)屬于Invitrogen公司），是的生產(chǎn)Alexa Fluor染料的公司。從我們收集的數(shù)據(jù)來看，Jackson Immunoresearch Laboratories公司的花青染料（Cyanine）系列標(biāo)記的二抗使用較多，而對(duì)于FITC，Jackson Immunoresearch Laboratories、Santa Cruz Biotechnology、DAKO 及Sigma公司均可選擇。Bio-Rad、Chemicon、Invitrogen或Sigma公司的羅丹明標(biāo)記的二抗使用較好。另外，如果你想放大檢測(cè)信號(hào)，你可以選擇生物素標(biāo)記的二抗，Jackson Immunoresearch Laboratories、Vector Laboratories 或R&D Systems均是不錯(cuò)的選擇。

對(duì)于流式細(xì)胞術(shù)，F(xiàn)ITC是選用zui多的標(biāo)簽，PE標(biāo)簽也可以使用。

對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)，HRP 和 AP標(biāo)簽使用zui多。

在免疫沉淀中，二抗的使用并不是很多，但偶爾也有使用，如用于蛋白的分離，一般選擇無耦聯(lián)標(biāo)記的二抗。