白介素7受體（可溶性）ELISA KIT

白介素7受體（可溶性）ELISA KIT，是一款用于定量檢測生物樣本中可溶性白介素 7 受體含量的工具，在免疫學(xué)研究等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

1. 檢測原理：采用雙抗體夾心 ELISA 法。試劑盒中的微孔板已預(yù)包被針對可溶性白介素 7 受體的特異性抗體。當(dāng)加入樣本后，樣本里的可溶性白介素 7 受體與固相抗體相結(jié)合。隨后加入酶標(biāo)記的抗可溶性白介素 7 受體抗體，其會和已結(jié)合在固相上的受體形成 “固相抗體 - 可溶性白介素 7 受體 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。經(jīng)過洗滌步驟去除未結(jié)合物質(zhì)，再加入底物溶液（如 TMB），在酶的催化作用下，底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與樣本中可溶性白介素 7 受體的含量成正比。通過酶標(biāo)儀在特定波長（一般為 450nm）下測量吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行對比，就能計算出樣本中該受體的濃度 。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：96 孔或 48 孔，預(yù)包被抗可溶性白介素 7 受體抗體，是反應(yīng)的載體 。

• 標(biāo)準(zhǔn)品：通常為凍干品，有 2 瓶。臨用前需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶并稀釋成不同濃度梯度，如 0、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本，保證其濃度處于試劑盒的檢測范圍內(nèi) 。

• 酶標(biāo)抗體：即 HRP 標(biāo)記的抗可溶性白介素 7 受體抗體，為濃縮液，使用時需按要求用酶標(biāo)抗體稀釋液稀釋 。

• 酶標(biāo)抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標(biāo)抗體 。

• 底物溶液：如 TMB 底物，可與酶標(biāo)抗體中的 HRP 發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化 。

• 洗滌液：一般為濃縮液，使用時需按比例用蒸餾水或去離子水稀釋，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結(jié)合的物質(zhì)，降低背景干擾 。

• 終止液：多為強酸溶液（如硫酸），用于終止底物的顯色反應(yīng)，使反應(yīng)液顏色穩(wěn)定，便于讀數(shù) 。

• 封板膜：用于在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。

• 使用說明書：詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項、性能指標(biāo)等 。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后，室溫放置 2 小時或 4℃過夜，1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用。采血應(yīng)使用無熱原、無內(nèi)毒素的一次性器材 。

• 血漿：可用 EDTA、肝素等抗凝劑。樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘，取上清 。

• 細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清 1000×g 離心 20 分鐘，去除細胞碎片和雜質(zhì)后取上清 。

• 組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS 沖洗組織，去除殘留血液，剪碎組織后按 1:9（w/v）加入 PBS，冰上充分研磨。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測 。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測，可 4℃保存；若長時間保存，需 - 20℃或 - 80℃凍存，且避免反復(fù)凍融，溶血樣本一般不適合檢測 。

4. 操作流程

• 準(zhǔn)備工作：從冰箱取出試劑盒，平衡至室溫（約 30 分鐘）。稀釋濃縮洗滌液 。

• 加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔?？瞻卓准訕颖緓i釋液，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入處理好的樣本，每孔加樣量通常為 100μL，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘 。

• 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復(fù)洗滌 5 次，確保洗凈未結(jié)合物質(zhì) 。

• 加酶標(biāo)抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標(biāo)抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 。

• 再次洗滌：同上述洗滌步驟 。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（根據(jù)實際顯色情況判斷） 。

• 終止反應(yīng)：每孔加入 50μL 終止液，此時溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色 。

• 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測量各孔的吸光度（OD 值） 。

• 計算結(jié)果：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本的 OD 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對應(yīng)的濃度，若樣本進行了稀釋，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到實際濃度 。

5. 性能指標(biāo)

• 檢測范圍：常見為 31.2 - 2000 pg/mL 等不同區(qū)間，能滿足多種樣本中可溶性白介素 7 受體含量的檢測需求 。

• 靈敏度：可低至 15.6 pg/mL 甚至更低，能檢測到樣本中微量的該受體 。

• 特異性：對可溶性白介素 7 受體具有高度特異性，與其他細胞因子受體等物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng) 。

• 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)一般小于 10%，板間變異系數(shù)小于 15%，保證了檢測結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性 。

6. 注意事項

• 嚴(yán)格按照說明書操作，不同批次試劑盒試劑不能混用 。

• 操作過程中使用一次性吸頭，避免交叉污染，加樣要準(zhǔn)確 。

• 洗滌充分是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵，洗板不che底易導(dǎo)致假陽性 。

• 底物溶液對光敏感，需避光保存和使用，顯色反應(yīng)要在避光條件下進行 。

• 終止液有腐蝕性，操作時注意防護，避免接觸皮膚和眼睛 。

• 建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本均做復(fù)孔檢測，以提高結(jié)果準(zhǔn)確性 。該試劑盒僅用于科研，不可用于臨床診斷 。