白介素-8 ELISA KIT 

白介素-8 ELISA KIT 是科研及臨床前期研究中常用的檢測工具，用于定量測定多種生物樣本中的白介素 - 8（IL-8）含量 。

1. 檢測原理：采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定法。試劑盒的微孔板上預包被了針對 IL-8 的特異性抗體。加入樣本后，樣本中的 IL-8 與固相抗體結合。接著加入酶標記的抗 IL-8 抗體，其與已結合在固相上的 IL-8 形成 “固相抗體 - IL-8 - 酶標抗體" 復合物。經過洗滌去除未結合物質，加入底物溶液（如 TMB），在酶的催化下，底物發(fā)生顯色反應，顏色深淺與樣本中 IL-8 的含量成正比。通過酶標儀在特定波長（通常為 450nm）下測量吸光度，與標準曲線對比，從而計算出樣本中 IL-8 的濃度 。

2. 試劑盒組成

• 酶聯板：已包被抗 IL-8 抗體，有 96 孔或 48 孔規(guī)格，是反應的載體。

• 標準品：一般為凍干品，需用試劑盒提供的標準品稀釋液復溶并稀釋成不同濃度梯度，如 0、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于繪制標準曲線。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本，確保其濃度在試劑盒的檢測范圍內。

• 酶標抗體：即 HRP 標記的抗 IL-8 抗體，為濃縮液，使用時需按要求用酶標抗體稀釋液稀釋。

• 酶標抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標抗體。

• 底物溶液：如 TMB 底物，與酶標抗體中的 HRP 發(fā)生反應產生顏色變化。

• 洗滌液：通常為濃縮液，使用時需按比例用蒸餾水或去離子水稀釋，用于洗滌酶聯板，去除未結合的物質，減少背景干擾。

• 終止液：一般為強酸溶液（如硫酸），用于終止底物的顯色反應，使反應液顏色穩(wěn)定，便于讀數 。

• 封板膜：用于在溫育過程中覆蓋酶聯板，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。

• 使用說明書：詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項、性能指標等 。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后，室溫放置 2 小時或 4℃過夜，1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用。采血應使用無熱原、無內毒素的一次性器材 。

• 血漿：可用 EDTA、肝素等抗凝劑。樣本采集后 30 分鐘內，2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘，取上清 。

• 細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清 1000×g 離心 20 分鐘，去除細胞碎片和雜質后取上清 。

• 組織勻漿：用預冷的 PBS 沖洗組織，去除殘留血液，剪碎組織后按 1:9（w/v）加入 PBS，冰上充分研磨。再經 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測 。

• 樣本采集后若短期內檢測，可 4℃保存；若長時間保存，需 - 20℃或 - 80℃凍存，且避免反復凍融，溶血樣本一般不適合檢測 。

4. 操作流程

• 準備工作：從冰箱取出試劑盒，平衡至室溫（約 30 分鐘）。稀釋濃縮洗滌液。

• 加樣：設置空白孔、標準品孔和樣本孔。空白孔加樣本xi釋液，標準品孔加入不同濃度的標準品，樣本孔加入處理好的樣本，每孔加樣量通常為 100μL，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘 。

• 洗滌：棄去孔內液體，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復洗滌 5 次，確保洗凈未結合物質 。

• 加酶標抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 。

• 再次洗滌：同上述洗滌步驟 。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（根據實際顯色情況判斷） 。

• 終止反應：每孔加入 50μL 終止液，此時溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色 。

• 讀數：在加終止液后 15 分鐘內，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的吸光度（OD 值） 。

• 計算結果：以標準品濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，繪制標準曲線。根據樣本的 OD 值從標準曲線中查出對應的濃度，若樣本進行了稀釋，需乘以相應的稀釋倍數得到實際濃度 。

5. 性能指標

• 檢測范圍：常見為 31.2 - 2000 pg/mL 等不同區(qū)間，能滿足多種樣本中 IL-8 含量的檢測需求 。

• 靈敏度：可低至 15.6 pg/mL 甚至更低，能檢測到樣本中微量的 IL-8 。

• 特異性：對 IL-8 具有高度特異性，與其他細胞因子等物質無明顯交叉反應 。

• 重復性：板內變異系數一般小于 10%，板間變異系數小于 15%，保證了檢測結果的穩(wěn)定性和可靠性 。

6. 注意事項

• 嚴格按照說明書操作，不同批次試劑盒試劑不能混用 。

• 操作過程中使用一次性吸頭，避免交叉污染，加樣要準確 。

• 洗滌充分是保證結果準確的關鍵，洗板不che底易導致假陽性 。

• 底物溶液對光敏感，需避光保存和使用，顯色反應要在避光條件下進行 。

• 終止液有腐蝕性，操作時注意防護，避免接觸皮膚和眼睛 。

• 建議標準品和樣本均做復孔檢測，以提高結果準確性 。該試劑盒僅用于科研，不可用于臨床診斷 。